Nazofaringeal ve orofaringeal sürüntü örneklerinden 28 solunum yolu viral ve bakteriyel patojeninin tespiti, ayırt edilmesi ve izlenmesi için kalitatif multipleks gerçek zamanlı RT-PCR paneli.
İnsan nazofaringeal ve orofaringeal sürüntü örneklerinden elde edilen nükleik asit ekstraktlarında seçilmiş solunum yolu viral ve bakteriyel patojenlerinin nükleik asitlerinin tespiti, ayırt edilmesi ve izlenmesi için kalitatif, multipleks gerçek zamanlı RT-PCR testidir. Tüm yaş gruplarındaki solunum yolu enfeksiyonu klinik şüphesi taşıyan semptomatik bireylerde — akut solunum yolu enfeksiyonu, influenza-benzeri sendrom (ILI), pnömoni şüphesi, kronik öksürük etiyolojisi, immün baskılanmış hasta sürveyansı ve hastane kaynaklı enfeksiyon araştırmasında — kullanım için tasarlanmıştır.
Bu test kalitatif tespit amacıyla tasarlanmıştır. Yarı-kantitatif izlem yalnızca UMS yazılımıyla yorumlandığında testin tespit limitine sabitlenmiş Cq değerleri aracılığıyla desteklenir.
| Hedef sayısı | 28 patojen, 8 multipleks well'e dağıtılmış (Mix 1-8) |
| İç kontrol | RPP-30 (HEX kanalında ko-amplifikasyon, tüm mikslerde) |
| Format | Plate formatı · pre-loaded oligo + enzim · pierceable folyo kapaklı |
| Reaksiyon hacmi | 10 µL toplam (oligo+enzim pre-loaded + 4 µL kalıp) |
| Döngü süresi | ~50 dk |
| Test tipi | Kalitatif multipleks RT-PCR · plate sütunları kırılarak ayrılabilir |
Bu tasarım, bir hasta örneğinden tek bir ekstrakt ile tüm panelin taranmasını sağlar — örnek başına 8 PCR reaksiyonu (Mix 1-8). Plate sütunları kırılarak ayrılabilir: yalnızca çalışma için gerekli sütunlar ayrılır; kalan sütunlar folyo kapaklı olarak sonraki kullanımlar için saklanır.
| Miks | FAM | HEX | ROX | Cy5 | Cy5.5 |
| Mix 1 | SARS-CoV-2 | İç Kontrol | RSV | İnfluenza A | İnfluenza B |
| Mix 2 | Parainfluenza Virüs 1 | İç Kontrol | Parainfluenza Virüs 2 | Parainfluenza Virüs 3 | Parainfluenza Virüs 4 |
| Mix 3 | Koronavirüs 229E | İç Kontrol | Koronavirüs HKU1 | Koronavirüs NL63 | Koronavirüs OC43 |
| Mix 4 | Legionella pneumophila | İç Kontrol | Chlamydia pneumoniae | Mycoplasma pneumoniae | İnsan Metapnömovirüs |
| Mix 5 | İnsan Rinovirüs / Enterovirüs | İç Kontrol | İnsan Bocavirüs | İnsan Parekovirüs | Haemophilus influenzae |
| Mix 6 | Adenovirüs | İç Kontrol | Bordetella parapertussis | Bordetella pertussis | Streptococcus pneumoniae |
| Mix 7 | İnfluenza A H1N1pdm09 | İç Kontrol | İnfluenza A H3 | İnfluenza A H1 | — |
| Mix 8 | — | İç Kontrol | — | Streptococcus pyogenes | — |
İnfluenza A alt tiplendirmesi: Mix 1 İnfluenza A'yı Cy5 kanalında tarama hedefi olarak tespit eder; Mix 7 alt tipi H1N1pdm09, H3 veya mevsimsel H1 olarak ayırır. Rinovirüs / Enterovirüs birleşik hedefi (Mix 5 FAM): 5'UTR primer seti rinovirüs ve enterovirüslerle çapraz reaktivite gösterir; pozitif sonuç "İnsan Rinovirüs / Enterovirüs tespit edildi" olarak raporlanır. Mix 6 ve Mix 7 Cy5.5: hiçbir hedef için kullanılmaz — sinyaller artifakt niteliğindedir.
| SARS-CoV-2 | ORF1ab & E |
| RSV (Respiratuvar Sinsisyal Virüs) | M & N |
| İnfluenza A · A H1N1pdm09 · A H3 · A H1 | M1 & PB2 · HA · HA · HA |
| İnfluenza B | M1 & NS2 |
| Parainfluenza Virüs 1-4 | HN |
| Koronavirüs 229E / HKU1 / NL63 / OC43 | N |
| Adenovirüs | hexon |
| İnsan Metapnömovirüs | N |
| İnsan Rinovirüs / Enterovirüs | 5'UTR |
| İnsan Bocavirüs | NS1 |
| İnsan Parekovirüs | 5'UTR + polyprotein |
| Legionella pneumophila | mip |
| Chlamydia pneumoniae | ompA |
| Mycoplasma pneumoniae | P1 |
| Bordetella parapertussis · Bordetella pertussis | IS1001 · ptxP |
| Haemophilus influenzae | pal |
| Streptococcus pneumoniae · Streptococcus pyogenes | lytA · Spy1258 (TetR/AcrR) |
| Uniqplex Plate | 2 plate · 8 mix × 12 sütun, oligo+enzim pre-loaded, pierceable folyo kapaklı 96 kuyu |
| NTC | 1 × 1000 µL · negatif kontrol |
| PC (Pozitif Kontrol) | 1 × 120 µL · reaktif stabilite kontrolü (8 miks hedefi içerir) |
| Pierceable yapışkanlı seal | 2 sheet · şeffaf PCR seal |
QuantStudio 5'te HEX kanalı VIC olarak raporlanır (aynı iç kontrol fluoroforu). Cy5.5 boya kalibrasyonu QuantStudio 5'te ilk kullanım öncesi yapılmalıdır. Önerilen plate hazırlama cihazı: Biosan CVP-2 (SMS — Spin-Mix-Spin programı).
Hedeflere göre tipik LoD değerleri: RNA hedefleri için ekstrakte örnekte 100-500 kopya/mL; DNA hedefleri için 50-500 kopya/mL aralığında. Hedef-bazlı LoD değerleri performans değerlendirme raporunda belgelenmiştir. Doğrusal amplifikasyon aralığı LoD'den yaklaşık 5-6 log₁₀ yukarıya kadar uzanır. Çapraz reaktivite Streptococcus mitis/oralis/salivarius grubu, Moraxella catarrhalis, Neisseria spp., Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, non-pneumophila Legionella türleri, Bordetella holmesii/bronchiseptica, Haemophilus parainfluenzae, mevsimsel koronavirüs varyantları, influenza alt tipleri ve panel hedefi olmayan rinovirüs/enterovirüs temsilcileri karşısında test edilmiş; gözlenmemiştir.
| Kullanım öncesi (folyo sağlam) | −20 °C · son kullanma tarihine kadar |
| Açıldıktan sonra | −20 °C · 4 ay (donma-çözme dahil) |
| Donma-çözme döngüsü | Maksimum 3 |
Sınıf B IVD cihaz. (EU) 2017/746 yönetmeliğinin geçici hükümleri kapsamında CE işaretli. (EU) 2017/746 (IVDR) kapsamındaki uygunluk değerlendirme süreci devam etmektedir. TİTCK kayıtlı. Sadece in vitro tanı kullanım için — laboratuvar ve profesyonel kullanım içindir.